L'échantillon d'urine utilisé pour l'ECBU est mis en culture dans une boîte de Petri. Si les cultures sont positives (les bactéries prolifèrent), un ou plusieurs antibiotiques sont ensuite disposés à différents endroits sur le support. S'il est efficace, l'antibiotique va détruire les bactéries à proximité et former ainsi une auréole visible à l'œil nu. Le diamètre du disque formé va donner une indication de la sensibilité de la bactérie à l'antibiotique testé. Plus le diamètre du disque est élevé, plus l'antibiotique est efficace.